Actualmente, hay 121 "Héroes" en Dota 2. Los héroes son poderosos unidades controladas por el jugador con habilidades especiales y únicas. Aunque muchos héroes tienen roles similares a otros, cada uno otorga diferentes ventajas y limitaciones al equipo. Los héroes comienzan siendo débiles al inicio de la partida, pero irán subiendo de nivel sus habilidades y estadísticas, al ir acumulando experiencia durante el transcurso del juego, pudiendo llegar hasta un máximo de treinta niveles. Los métodos de combate de los héroes están muy influenciados por su característica principal, que puede ser fuerza, agilidad, o inteligencia. La mayoría de los modos de juego ofrecen equipos con un tiempo de preparación antes de que comience el juego, para que así se pueda decidir la selección de héroes, ya que la composición del equipo puede afectar significativamente su rendimiento durante toda la partida. Debido a que Dota 2 es altamente orientado al juego en equipo, los jugadores deben coordinar y planificar sus acciones con sus compañeros con el fin de lograr la victoria.

Los jugadores tienen 9 ranuras de inventario, solo 6 se pueden usar, se llenan por la compra de artículos a cambio de oro, la moneda principal del juego. Estos artículos varían drásticamente en su función: algunos simplemente mejoran las estadísticas de un héroe, mientras que otros les otorgan habilidades que se pueden activar o pasivas adicionales. Su precio varía en relación con su beneficio. Aunque el oro se concede constantemente (a un ritmo lento), los artículo más caros normalmente solo son comprados por los héroes con una tasa de acumulación de oro bastante alta, lo que por lo general se consigue al matar eficientemente a los creeps, héroes o estructuras enemigas. Matar personajes no-jugadores otorga oro únicamente al aquel jugador que dio el golpe final, mientras que matar héroes otorga oro al asesino y a cualquier aliado cercano, y la destrucción de torres o matar a Roshan da oro a todos los jugadores del equipo más una recompensa adicional a aquel que le haya dado el último golpe. Además del botín de oro, matar unidades y estructuras será recompensado con experiencia a medida que los jugadores cumplen objetivos, permitiendo a sus héroes subir de nivel. "Denegar" es una característica del juego que permite a los jugadores la capacidad de reducir la acumulación de oro al matar a una unidad aliada o destruir una estructura aliada antes de que el enemigo la destruya